افزایش بیان عامل فعال کننده پلاسمینوژن بافتی نوترکیب در سلول‏های cho با استفاده از ناقل بیانی حاوی نواحی متصل شونده به ماتریکس و روش فعال‏سازی راه‏انداز

هدف: ایجاد رده‏های سلولی دارای بیان بالا یک مرحله محدود کننده اصلی در روند تولید پروتئین‏های نوترکیب دارویی است. در این مطالعه اثر به‏کارگیری ناحیه متصل شونده به ماتریکس ژن اینترفرون بتای انسانی به‏همراه روش فعال‏سازی راه‏انداز از طریق پروتئین e1a 13s بر بیان فاکتور فعال کننده پلاسمینوژن بافتی (t-pa) در سلول‏های تخمدان هامستر چینی بررسی شده است. مواد و روش‏ها: ناحیه متصل شونده به ماتریکس در سمت ΄5 و΄3 واحد بیان کننده t-pa در ناقل ptpa کلون شد تا ناقل pmtpa به‏دست آید. پس از ترانسفکشن سلول‏ها با ناقل‏های ptpa و pmtpa، رده‏های سلولی پایدار ایجاد شده و میزان بیان t-pa برای هر رده تعیین شد. در مرحله بعد، پلاسمید بیان کننده e1a 13s به سلول‏های پایدار ترانسفکت شده و میزان بیان t-pa پس از 72 ساعت اندازه‏گیری شد. نتایج: الحاق ناقلین ptpa و pmtpa به ژنوم سلول cho از طریق انجام pcr روی dna ژنومی سلول‏های پایدار تأیید شد. بررسی میزان بیان t-pa افزایش بیان به‏میزان سه برابر را در سلول‏های ترانسفکت شده با ناقل pmtpa در مقایسه با رده ایجاد شده با ptpa نشان داد. بیان موقتی e1a 13s در رده‏های پایدار منجر به افزایش تیتر t-pa به 1771 واحد در هر میلی‏لیتر در سلول‏های ایجاد شده با ناقل pmtpa شد. نتیجه‏گیری: نتایج این تحقیق نشان‏دهنده آنست که به‏کارگیری ناحیه متصل شونده به ماتریکس در ناقل بیانی به‏همراه روش فعال‏سازی راه‏انداز می‏تواند به‏صورت مؤثر میزان بیان پروتئین‏های نوترکیب در سلول‏های cho را افزایش دهد.